二代測序 QC 全流程，這可能適合你的QC方案?。。?/h1>

點擊次數(shù)：2089  更新時間：2020-12-24

 

     在過去的數(shù)年間，二代測序（ NGS ）在幾乎所有的遺傳研究和診斷領域都發(fā)展為了一個強大的工具。而任何 NGS 實驗成功的關鍵是初始 RNA 和 DNA 樣本以及它們所生成的文庫的質量控制（QC）。

二代測序(NGS)的建庫流程是很長很復雜的，建庫的每一步都建立在前一步的基礎上，因而質量控制（QC）顯得尤為重要。無論您的初始樣本類型是什么，在整個實驗流程中，確保靶標的完整性、大小和集中程度是構建高質量文庫，進而獲得準確、可重復的結果的關鍵。為了幫助您更好地確定實驗流程，安捷倫匯總了各類初始樣本的各種建庫流程。

理想的 NGS 質 控步驟應易于操作、經濟，并且對于濃度非常低的樣品也能提供快速且無爭議的結果。本質控方法是運用瓊脂糖電泳法來判斷樣本的大小與完整性，該方 法成本低，但有種種局限性，具體就不在此贅述。確保樣品“滿足目標用途”的另一種方法是應用自動化的電泳分離，并進行熒光檢測和自動數(shù)據分析。

 

 

 

 

測序過程中的關鍵 QC 步驟

• Fragmentation

片段化是將樣本剪切成更小的片段的過程。可以通過酶切或超聲的方法來實現(xiàn)。QC 是這里的一個重要步驟，以確保片段化的條件是合適的。

• Ligate adaptors

接頭是已知的寡核苷酸序列，用于連接到未知的目標測序片段，提供測序引物結合區(qū)和樣本識別碼。接頭連接后的 QC 可以確保接頭成功連接到 DNA。

• Size selection

片段篩選的目的是去掉多余的引物和接頭序列，獲得需要的目標序列。QC 在這一步是至關重要的，可以確保后留下的是目標大小和足夠濃度的文庫。

• Normalize/pool

在文庫制備結束時，必須對樣本進行量化，以確定要加載到測序儀上的文庫量。如果需要多個文庫混合上機測序，QC 可以幫助提供稀釋指導，確保加載到測序儀上的文庫是均勻的，有利于提高數(shù)據的均一性。

 

 

 

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